★二、紫外-可見分光光度計

　　(一)基本結(jié)構(gòu)：

　　光源 紫外：氘燈或氫燈;可見: 鎢燈或鹵鎢燈

　　單色器 色散元件(光柵或棱鏡);狹縫

　　吸收池 紫外: 石英; 可見: 玻璃, 石英

　　檢測器 光電池、光電管、光電倍增管、光二極管陣列檢測器

　　數(shù)據(jù)記錄和處理

　　(二)儀器的校正和檢定

　　(1) 波長的校正 汞燈或氘燈的特定譜線為參照或鈥玻璃的特定波長

　　(2)吸光度的準確度檢定 用重鉻酸鉀的硫酸溶液

　　(3)雜散光的檢查 一般來源于光學儀器表面的瑕疵

　　三、 吸光度的測定要求

　　1. 溶劑 應(yīng)符合規(guī)定

　　2. 作空白試驗校正 目的：消除溶劑和吸收池的影響

　　3. 測定波長的檢查 一般以吸光度最大的波長 max為測定波長，吸收峰的波長應(yīng)在該品種規(guī)定波長的±2%以內(nèi)，否則應(yīng)考慮供試品的真?zhèn)�、純度及儀器波長正確性。

　　影響波長檢查結(jié)果的條件有：供試品的真?zhèn)闻c純度、溶劑的種類 、儀器波長的正確性

　　4. 供試品溶液濃度 使吸光度在0.3-0.7范圍內(nèi)

　　5. 儀器狹縫寬度的選擇 調(diào)至供試品溶液的吸光度不再增加為止

　　♣♣四、應(yīng)用

　　(一)鑒別 《中國藥典》所采用方法：

　　1. 核對吸收光譜的特征參數(shù)：最大吸收波長lmax，吸收系數(shù)E1%1cm;吸光度 A

　　2. 比較吸光度比值： Al1 /Al2®El1/El2

　　3. 比較吸收光譜的一致性

　　(二)雜質(zhì)檢查：

　　依據(jù)：藥物與雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同，故吸收光譜也不同。

　　1. 藥物在紫外可見光區(qū)沒有明顯吸收，所含雜質(zhì)有較強吸收¾¾少量雜質(zhì)可用光譜檢索出來。

　　2. 藥物有較強吸收;雜質(zhì)無吸收或很弱¾E(e)¯ 或雜質(zhì)有更強吸收¾¾ E(e)­

　　規(guī)定吸光度的上下限可在一定程度上控制雜質(zhì)的量

　　(三)含量測定：

　　紫外分光光度法用于含量測定的方法有三種：前三種方法

　　(1)對照品比較法：

　　 AR/AX=ECRL / ECXL =CR/ CX Þ CX=(AX/AR)CR

　　供試品溶液與對照品溶液濃度C及測定條件應(yīng)一致，E、L相等

　　(2)吸收系數(shù)法(絕對法)：

　　♣♣♣♣ A=E1%1cm CL ÞC=A/(E1%1cmL)

　　對儀器須進行嚴格的校正和檢定(波長的準確度、狹縫寬度符合要求)，否則影響準確度

　　(3)計算分光光度法 如雙波長分光光度法、導數(shù)光普法

　　主要用于消除樣品中干擾組分的干擾

　　(4)比色法(屬于可見分光光度法) 顯色劑顯色后測定

　　§2. 熒光分析法

　　一、基本原理

　　(一)熒光的產(chǎn)生：某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后，能發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的熒光;除去激發(fā)光源，熒光立即熄滅。

　　熒光的能量小于激發(fā)光的能量，波長則長于激發(fā)光。

　　(二)熒光光譜

　　熒光激發(fā)光譜¾¾熒光的激發(fā)光波長為橫坐標;發(fā)射光強度為縱坐標

　　熒光發(fā)射光譜¾¾激發(fā)光波長和強度不變，熒光物質(zhì)的不同熒光波長為橫坐標;發(fā)射光強度為縱坐標

　　激發(fā)光波長、強度不變，測定用溶劑、溫度等條件一定時，熒光強度與物質(zhì)濃度成正比——定量依據(jù)。