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霍亂弧菌的檢驗(yàn)方法

　　1)直接鏡檢：

　　動力觀察：采取病人“米泔水樣”大便或嘔吐物制成懸滴片，觀察細(xì)菌動力，可見流星或穿梭狀動力的細(xì)菌。

　　制動試驗(yàn)：取病人“米泔水樣”大便標(biāo)本或6小時蛋白胨水增菌液中發(fā)現(xiàn)運(yùn)動活潑的弧菌，可再做一張涂片，加一滴不含防腐劑的霍亂多價診斷血清(效價1：64)，用暗視野鏡觀察，3分鐘內(nèi)最初活潑的弧菌被凝集，運(yùn)動被抑制，即為陽性，則可鑒定。

　　涂片染色：取標(biāo)本涂片2張，干燥后用乙醇固定，分別用革蘭染色及1：10稀釋復(fù)紅染色，鏡檢有無革蘭氏陰性，并成魚群狀排列的弧菌。

　　2)細(xì)菌分離培養(yǎng)

　�、僦苯臃蛛x培養(yǎng)：急性期患者米泔水樣糞便標(biāo)本，除增菌外可同時將標(biāo)本分離培養(yǎng)，�？色@得陽性結(jié)果。分離用的培養(yǎng)基有強(qiáng)、弱2種選擇培養(yǎng)基。弱選擇培養(yǎng)基如堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂，抑制能力弱，糞便中某些雜菌仍可生長。強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基常用的有慶大霉素瓊脂等�，F(xiàn)多采用堿性蛋白胨水增菌，再用強(qiáng)選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離。

　�、谠鼍�后分離培養(yǎng)：來自帶菌者或恢復(fù)期患者的標(biāo)本，因含菌量少必須先增菌后分離�？蓪�標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水內(nèi)，置35℃增菌6-8小時后分離培養(yǎng)，必要時可做二次增菌后再進(jìn)行分離培養(yǎng)。

　　3)鑒定：

　　根據(jù)霍亂弧菌在各種選擇培養(yǎng)基上的特點(diǎn)，挑選可疑菌落進(jìn)行鑒定。鑒定以血清學(xué)(玻片凝集)為主，結(jié)合形態(tài)學(xué)、生化反應(yīng)作出判斷。必要時作其他試驗(yàn)以便與其他細(xì)菌進(jìn)行鑒別。

　　①玻片凝集試驗(yàn)：從分離培養(yǎng)基上挑取可疑菌落于霍亂弧菌多價診斷血清(效價1:32-1:64)作玻片凝集試驗(yàn)。立即出現(xiàn)凝集者為陽性，同時設(shè)生理鹽水和陽性細(xì)菌株對照。

　�、谛螒B(tài)學(xué)檢查：取純培養(yǎng)物涂片革蘭氏染色，觀察菌體形態(tài)及染色性。用懸滴法或半固體穿刺法檢測動力。

　�、凵�化反應(yīng)：霍亂弧菌氧化酶試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、粘絲試驗(yàn)和霍亂紅試驗(yàn)均陽性。

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