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雙向擴(kuò)散試驗(yàn)
雙向擴(kuò)散試驗(yàn)：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在最恰當(dāng)?shù)谋壤幮纬煽乖贵w沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可對(duì)抗原或抗體作出定性分析。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)也分為試管法和平板法。
1、試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴(kuò)散，在抗原、抗體濃度最適時(shí)形成沉淀線。
2、平板法：
是在瓊脂板上相距3～5mm打一對(duì)孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。在相應(yīng)孔中加入抗原或抗體，待其自由擴(kuò)散后，抗原、抗體形成可見(jiàn)的沉淀線。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：①抗原、抗體是否存在及其相對(duì)含量。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。
�、诳乖⒖贵w相對(duì)分子量的分析;抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量影響。分子量小者，擴(kuò)散快，反之較慢。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。如若兩者分子量相等，則形成直線。
③抗原性質(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況;
④抗體效價(jià)的滴定�？贵w效價(jià)是抗原、抗體經(jīng)過(guò)自由擴(kuò)散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)
單向擴(kuò)散試驗(yàn)
單向擴(kuò)散試驗(yàn)：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。
1、試管法：將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，在抗原抗體比例恰當(dāng)位置形成沉淀環(huán)。
2、平板法：是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴(kuò)散，24～48h后可見(jiàn)孔周?chē)霈F(xiàn)沉淀環(huán)，測(cè)定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原的濃度。有兩種計(jì)算方法：l)Mancini曲線：適用大分子抗原的和長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)散(>48h)的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.(其中c為抗原濃度d為沉淀環(huán)直徑k為常數(shù))
3、單向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)時(shí)的注意點(diǎn)：
(1)抗血清必須特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)，在良好條件下保存。
(2)每次測(cè)定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(3)每次測(cè)定時(shí)必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。
(4)注意雙環(huán)現(xiàn)象(出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分)。
(5)應(yīng)用單克隆抗體測(cè)量多態(tài)性抗原時(shí)，測(cè)定值偏低;用多克隆抗體測(cè)量單克隆病時(shí)，測(cè)定值偏高。
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