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精子的功能檢查

　　精子的功能檢查目前應用的是精子低滲腫脹試驗(HOS)。

　　1.檢測方法：將精子置入低滲溶液中，由于滲透壓改變，精子為維持內(nèi)外體液間的平衡，水分可通過精子膜進入精子，由于精子尾部的膜更柔軟、疏松，所以尾部可腫脹或彎曲。用相差顯微鏡觀察，計算100～200個精子中出現(xiàn)腫脹的百分率。

　　2.結(jié)果判斷：a型，未出現(xiàn)腫脹;b型，尾尖腫脹;c型，尾尖彎曲腫脹;d型，尾尖腫脹伴彎曲腫脹;e型，尾彎曲腫脹;f型，尾粗短腫脹;g型，全尾部腫脹。

　　3.參考值：g型腫脹精子率>50%。

　　4.臨床意義：精子尾部低滲腫脹試驗可作為體外精子膜功能及完整性的評估指標，預測精子潛在的受精能力。有研究表明，不育癥的精子尾部腫脹率明顯減低。

免疫細胞的分離

　　(1)外周血單個核細胞的分離外周血中單個核細胞(淋巴細胞和單核細胞)的比重與紅細胞、多核白細胞及血小板不同，介于1.075～1.090之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細胞按相應密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。

　　(2)淋巴細胞的分離1)純淋巴細胞群的采集：利用單核細胞在37℃和Ca2+存在時，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個核細胞懸液中除去單核細胞，從而獲得純淋巴細胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法。

　　2)淋巴細胞亞群的分離原則：選擇純化所需細胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細胞，僅留下所需的細胞為陰性選擇法。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結(jié)合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細胞分離儀分離法。

　　(3)淋巴細胞的保存與活力測定①短期保存技術：短期保存可置于4℃保存。

　�、陂L期保存技術：液氮深低溫(-196℃)環(huán)境保存細胞，加入二甲亞砜作為保護劑。

　　③活力測定：最簡便常用的為臺盼藍染色法，呈藍色。

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